Vércsoportok meghatározása ciklonok segítségével

A VÉR CSOPORT MEGHATÁROZÁSA AZ ABO RENDSZER segítségével

PLASMA ANTIGENS

A plazma (szérum) antigének bizonyos aminosavak vagy szénhidrátok komplexei a vérplazma (szérum) protein molekulák felületén.

Az vércsoport fogalma

VÉR CSOPORT - a vér normál immunológiai és genetikai jeleinek kombinációja, amelyet örökletesen meghatároznak, és amely minden egyes ember biológiai tulajdonsága.

A vércsoportok öröklõdõek, a magzati fejlõdés 3-4 hónapjában alakulnak ki, és egész életük alatt változatlanok maradnak. Úgy gondolják, hogy emberben a vércsoport több tucat antigént tartalmaz különféle kombinációkban. Ezek a kombinációk - vércsoportok - valójában több milliárd lehet. A gyakorlatban csak azonos ikreknél azonos genotípusúak azonosak..

A gyakorlati orvoslásban a „vércsoport” kifejezés általában az ABO rendszer eritrocita antigénjeinek és az Rh faktornak, valamint a vér szérumában lévő megfelelő antitesteknek a kombinációját tükrözi..

Minden ismert antigénhez azonos nevű antitesteket találtak (anti-A, anti-B, anti-Rhesus, anti-Kell stb.). A vércsoport antitestek az emberi testben nem olyan állandó tulajdonságai, mint az antigének. Csak az ABO csoport rendszerében az ellenanyagok a vérplazma normális veleszületett tulajdonsága. Ezek az antitestek (a és b agglutininek) folyamatosan jelen vannak a humán plazmában.

1. VÉR CSOPORTOK

A „összeegyeztethetőség” kifejezés alatt egy donor és recipiens vérének kombinációját értjük, amely antigéneket és antitesteket nem okoz immunológiai interakciókat..

Az A és B agglutinogének jelenlététől függően a vörösvértestekben és a megfelelő a és b agglutininek szérumában az összes embert négy csoportra osztják:

• O (I) csoport - nincsenek agglutinogének a vörösvértestekben, a és b agglutininek a szérumban.

• A (II) csoport - agglutinogén A a vörösvértestekben, agglutinin b a szérumban.

• B (III) csoport - agglutinogén B a vörösvértestekben, agglutinin a a szérumban.

• AB (IV) csoport - A és B agglutinogének a vörösvértestekben, nincs agglutinin a szérumban.

Az A antigén nem homogén, két fő altípusa van: Ennek értelmében az A (II) csoportnak két A (P) és A alcsoportja van.2 (II), valamint az AB (IV) - AB (IV) és A csoport2Iv..

A B csoport antigén egységesebb, bár ritka változatait ismertetik. Ennek azonban nincs szignifikáns klinikai jelentősége.

Az ABO rendszer szerinti csoportos vérhez való kapcsolódást az agglutinációs reakció alkalmazásával határozzuk meg. Jelenleg három módszer létezik a vércsoportok meghatározására az ABO rendszer szerint:

• szokásos izo-izoglutináló szérumokhoz,

• standard izo-izoglutináló szérumokhoz és standard vörösvértestekhez (keresztmetszeti módszer),

• monoklonális antitestek (anti-A és aichi-B ciklonok) felhasználása.

Egy rutin vizsgálatban a kórházi orvos szokásos izoemagglutináló szérumokkal vagy ciklonok segítségével meghatározza a vércsoportot, majd vért küld a szerológiai laboratóriumba, hogy keresztmetszeti módszerrel ellenőrizze a csoportot..

A vércsoportot csak akkor tekintik meghatározottnak, ha a laboratórium megerősítette a kórházi orvos által kapott adatokat. Ha a vizsgálatok eredményei eltérnek, mindkét vizsgálatot meg kell ismételni..

Vészhelyzetben (amikor a vérzés sürgõs vérátömlesztést igényel) a kórházi orvos maga határozza meg a csoportot (laboratóriumban ellenõrzést végeznek, de a tény után).

VÉRCSOPORTOK MEGHATÁROZÁSA SZABVÁNYOS ISOGEMAGLUTINIZÁLÓ SZERUMVAL

Általános a klinikai és laboratóriumi gyakorlatban.

A módszer lényege az A és B csoport antigének kimutatása a vizsgálati vérben, standard izo-izoglutináló szérumok felhasználásával. Kivitelezés egy jól megvilágított helyiségben, 15-25 ° C hőmérsékleten.

a) Szükséges felszerelés

• Két különféle sorozat O (I), A (II), B (III) és AB (IV) csoportjának standard izo-izoglutináló szérumai. A szérumnak átlátszónak kell lennie, és nem mutathat bomlást. A kényelem érdekében a különféle csoportok szokásos hemagglutináló szérumát színezzük bizonyos színben: O (I) - színtelen (szürke), A (II) - kék, B (III) - piros, AB (IV) - élénk sárga. Meg kell jegyezni, hogy ezek a színek a csoporthoz tartozó vérkészítmények minden címkéjén szerepelnek (vér, eritrociták tömege, plazma stb.).

• Fehér porcelán- vagy zománclapok vagy bármilyen más, nedvesíthető felületű lemez, 0 (1), A (P), H (W), AB (IV) jelöléssel.

• Izotóniás nátrium-klorid-oldat.

• Tűk, pipetták, üvegpálcák (üveglapok).

b) Reakciós technika

1. Egy tányérra (lemezre) vigyünk fel az I, II, III szérumcsoportokat izo-izoglutináló szérumcsoportokkal 0,1 ml térfogatban (egy nagy csepp körülbelül 1 cm átmérőjű). A hibák elkerülése érdekében az egyes csoportokból két szérum sorozatot alkalmazunk. Összesen 6 csepp.

2. Hat csepp vizsgálati vért, körülbelül 0,01 ml-es csapfejes méretű (kis csepp), száraz üvegrúddal egymás után áthelyezzük egy 6 pontos lemezre, mindegyik mellett egy csepp standard szérumot (a tesztvér mennyiségének körülbelül tízszeresének kell lennie, mint a standard szérum mennyiségének). ), majd óvatosan összekeverik, lekerekített élekkel ellátott üvegrudakkal.

3. A lemez összekeverése után időszakosan rázza meg.

Az agglutináció az első 10-30 másodpercen belül kezdődik.

4. Azokban a cseppekben, ahol agglutináció történt, adjon hozzá egy csepp izotóniás nátrium-klorid-oldatot, majd a reakció eredményét kiértékeli.

Pozitív reakcióval, általában az első 10–30 másodpercen belül, szabad meleg szemmel látható, ragasztott vörösvértestekből álló kis vörös szemcsék (agglutináltak) jelennek meg a keverékben.

Ha mindhárom csoport széruma pozitív reakciót adott, ez azt jelzi, hogy a tesztvér mind az A, mind a B agglutinogént tartalmazza, és az AB (IV) csoporthoz tartozik. Ilyen esetekben azonban a nem specifikus agglutinációs reakció (hideg agglutináció, pangglutináció, allergia) kizárásához további ellenőrző vizsgálatot kell elvégezni a vizsgált vérről az AB (IV) csoport standard izo-izoglutináló szérumával, amely nem tartalmaz agglutininokat. Csak akkor, ha ebben a cseppben nem jelenik meg agglutináció, az agglutináció jelenlétében olyan cseppek jelenlétében, amelyek a 0 (1), A (II) és B (III) csoportba tartozó szérumokat tartalmazzák, lehetővé teszi, hogy a reakciót specifikusnak tekintsük, és a vizsgálati vért az AB csoporthoz rendeljük.0 (Iv).

Meg kell jegyezni, hogy gyenge A antigén altípus jelenlétében a vérben az agglutinációs reakció a 0 (1) és B (III) csoport hemagglutináló szérumaival később (3-4 perc) kezdődik. Az antigén A altípus pontos meghatározásához további reakcióra van szükség az úgynevezett anti-A reagenssel.

VÉRCSOPORTOK MEGHATÁROZÁSA SZABVÁNYOS ISOGHEMAGLUTINIZÁLÓ SZERUM ÉS SZABVÁNYI ERITROCITOK SZERINTI KERETMÓDSZER

A módszert leggyakrabban a szerológiai laboratóriumokban használják. A módszer lényege az A és B csoport antigének jelenlétének vagy hiányának meghatározása standard izo-hemagglutináló szérumok, valamint az a és b csoport antitestek standard vörösvértestek alkalmazásával a tesztvérében..

• A szabványos vörösvértestekkel történő reagálás felszerelése abban különbözik, hogy az agglutinációs reakcióhoz három vércsoport standard vörösvérsejtjeire van szükség: 0 (1), A (II), B (III).

• A standard vörösvértesteket olyan donorok véréből állítják elő, akik korábban ismert vércsoporttal rendelkeznek, 4-8 ° C-on tárolva.

A tesztcsőből egy nagy csepp tesztvér szérumot (0,1 ml) vittünk fel egy jelölt lemezre pipettával hat sejtben, mellette egy kis csepp (0,01 ml) a 0 (1), A (P) csoportba tartozó standard vörösvérsejtek, H (W) (két sorozat).

A standard eritrocitákkal kapott reakció eredmények értelmezésének egyik jellemzője, hogy a 0 (1) csoport eritrociták kontrolláltak (nincsenek benne antigének, ami elvileg lehetetlenné teszi a specifikus agglutinációs reakciót bármely szérummal)..

A vércsoportok meghatározása monoklonális antitesttel

A monoklonális antitesteket a vércsoport meghatározására használják, amelyre hibridóma biotechnológiát alkalmaznak..

A hibridóma egy sejt hibrid, amelyet egy csontvelő daganatsejt (mielóma) fuzionálással hoznak létre, amely specifikus monoklonális antitesteket szintetizáló immun limfocitákat tartalmaz. A hibridóma megszerzi mindkét „szülő” tulajdonságait: a tumorsejtekre jellemző korlátlan növekedési képességet és az immun limfocitában rejlő antitestek szintetizálásának képességét.

Szabványos reagensek - monoklonális antitestek (MAB) kerültek kifejlesztésre: anti-A és anti-B kolikonok, amelyeket az eritrociták agglutinogének meghatározására használnak. A Tsoliklon liofilizált, vörös (anti-A) vagy kék (anti-B) színű por, amelyet közvetlenül a vizsgálat előtt izotóniás nátrium-klorid oldattal hígítanak..

Az anti-A és anti-B ciklonális ciklonokat fehér tablettára visszük fel, egy nagy csepp (0,1 ml) a megfelelő címkék alatt: anti-A vagy anti-B. Az antitestek cseppje mellett egy kis csepp (0,01 ml) vizsgálati vért kell felvinni. A komponensek összekeverése után az agglutinációs reakciót 2-3 percig megfigyeljük.

1940-ben K. Landsteiner és A. S. Wiener egy teljesen új antigént fedeztek fel az emberi vörösvértestekben, amelyeket Rh faktornak (Rh) hívtak. A rhesus faktor az emberek 85% -ának a vérében fordul elő, az egyének 15% -a nem tartalmazza ezt a faktorot. Tehát Macaque Rhesus néven hívják, aminek mindig is van.

A rhesus antigéneket lipoproteinekként osztályozzák. Nagyon aktívak és képesek immunválaszt létrehozni..

A rhesus antigén jelenlétét az emberi magzatban 5-8 héttól kezdve észlelik, és egy 3-4 hónapos embrióban jól expresszálódik..

|következő előadás ==>
VÉRÁTÖMLESZTÉS|MÓDSZEREK A RESUS FAKTOR MEGHATÁROZÁSÁHOZ

Hozzáadás dátuma: 2014-01-06; Megtekintések: 7636; szerzői jogok megsértése?

Az Ön véleménye fontos számunkra! Hasznos volt a közzétett anyag? Igen | Nem

Vércsoport meghatározási módszerek

Minden embernek hasznos megjegyezni a vércsoportját. Ez hasznos lehet vészhelyzetekben. Nem hiába, hogy a katonai személyzetnek vércsoportja van egy tunikában vagy zsetonban. A vércsoport meghatározásával kapcsolatos problémák nem léteznek. A nagy kórházakban a laboratóriumok ezt teszik. De még a kis vidéki járóbetegekben is vannak szabványos készletek a csoport meghatározására, és minden orvos és paramedicinális munkatárs képesek elemzésre. Ha önálló szakember van, akkor önmagában csinálni felesleges.

A gyermekek milyen vércsoportját feltételezhetik a szülők. Például, ha tudjuk, hogy a szülőknek van egy második, harmadik vagy negyedik, nem szabad azt remélni, hogy a gyermeknek lesz az első.

Otthonmeghatározási tippek

Ilyen tanácsot azok az emberek adnak, akik "élnek" az interneten, és bármilyen információt megkülönböztetés nélkül gyűjtnek. Időnként megváltoztatják ezt a saját módjukon.

Valójában létezik a táplálkozás elmélete a vér típusától függően, és megkíséreltek hozzákapcsolni az ember karakterét. Ennek célja azonban a legmegfelelőbb étrend, a betegségmegelőzés kiválasztása. Még a pszichológusok is abbahagyták a személyiség típusa és a vérszám közötti összefüggést..

Sőt, nem tudja megítélni a kedvenc ételei alapján vagy a csoport vezetésével szemben támasztott döntés alapján.

Otthon tanuljon valami jobbat a teljes értékű cikkekből, szakértői tanácsokból. Talán vannak olyan orvosi dokumentumok (járóbeteg-kártya, kivonatok a kórházból), amelyek információkat tartalmaznak a véréről.

A donorok és a kórházi betegek kérésére útlevelet bélyegzhetnek ezen információkkal.

Ki találta ki vércsoportokat?

A négy vércsoport úttörője az osztrák tudós és orvos K. Landsteiner, aki erre 1930-ban Nobel-díjat kapott. A felfedezés lehetővé tette a transzfúzió miatti halálesetek megelőzését, a donor tulajdonságok és a recipiens összeegyeztethetőségének korábbi vizsgálatát.

A javasolt AB0 rendszer lényege az antigén szerkezetek jelenléte az emberek és állatok vörösvérsejtjein. A plazmában tipikus ellenanyagok (gammaglobulinok) nem állnak rendelkezésre. Ezért az antigén + antitest reakció felhasználható a meghatározásra.

A vörösvértestek ragasztása az antigénnek az ellenanyaggal való találkozásakor történik. Ezt a reakciót hemagglutinációnak nevezzük. Az elemzés során kis pelyhek formájában látható. A vércsoport meghatározása egy tipikus szérum agglutinációs mintán alapul..

Az A típusú vörösvértest antigének ά, B és β ellenanyagokhoz kötődnek. A vér összetétele:

  • I vagy 0 (ά, β) - a vörösvértestek felületén egyáltalán nincs antigén;
  • II vagy A (β) - tartalmaznak A antigént a P ellenanyaggal;
  • III vagy B (ά) - van egy B típusú antigén anti ellenanyaggal;
  • IV. Vagy AB (00) - mindkét antigént tartalmaz, de antitesteket nem tartalmaz.

Az antigének az emberi embrióban már az embrionális periódusban vannak jelen, és az antitest (agglutininek) az újszülöttek szérumában jelennek meg az élet első hónapjában.

Vércsoport meghatározása (egyszerű módszer)

A vércsoport-elemzés elvégzéséhez szükség van a beteg vörösvértesteire (egy vércseppből) és ismert antigéneket tartalmazó standard szérumokra..

Egy nagy négy négyszérumot csepegtetünk két sorba egy lapos lemezre két sorban (csak a III és a II elegendő, de az 1 és 1 V ellenőrzés céljából). Különböző üvegpálcákkal (kényelmes szemcseppeket használni) a vizsgált vért hozzáadjuk a szérumcseppekhez (az arány kb. 1:10), és óvatosan keverjük.

Rázza meg a lemezt öt percig, hagyva, hogy a szérum jól keveredjen a vérrel.

Az eredmények titkosítása

5 perc telik el, és az elemzés eredményei kiértékelhetők. A szérum nagy cseppjeiben megvilágosodás fordul elő, néhány apró pehely formájában (agglutinációs reakció), másokban nem. Itt vannak a lehetőségek:

  • ha mindkét mintában nincs agglutináció a III. és II. csoport szérumával (+ 1. és 1V kontroll) - ez az első csoport;
  • ha az alvadást csak a II. kivételével észlelik, ez jelzi a második csoportot;
  • csak III szérummal történő agglutináció hiányában létrejön egy harmadik vércsoport;
  • ha az alvadást minden mintában megfigyelték, beleértve az 1 V kontrollcsoportot is.

Amikor a szérumok a megfelelő sorrendben vannak, az aláírásokat a tányérra helyezik, így könnyű navigálni: ahol nincs agglutináció, ilyen csoport.

Vannak idők, amikor a kötés nem egyértelmű. Ezután az elemzést újrakészítik, és a finom agglutinációt mikroszkóp alatt megfigyelik.

Keresztreakció módszer

A nem tisztázott agglutinációval rendelkező csoport tisztázása érdekében a kettős keresztreakció módszerét alkalmazzuk a standard vörösvértestekkel. Ebben az esetben nem a szérum ismert, mint az egyszerű módszernél, hanem a vörösvértestek. Egy betegben a vért egy kémcsőbe szívják, centrifugálják, és felülről szivattyúzzák a szérumot a csövek vizsgálatához..

2 nagy csepp szérumot csepegtetünk egy lapos fehér tányérra. Hozzáadják a standard vörösvértestek A (II) és B (III) vércsoportjait. Fokozatosan keverjük, rázzuk fel a lemezt.

Az eredményt 5 perc elteltével értékelik:

  • ha agglutináció fordul elő mindkét cseppben, akkor az első csoportba;
  • ha nincs jelen mintában, akkor a negyedik csoport;
  • ha a használt ismert vörösvértestek valamelyikében a csoportot a csepp jelenléte vagy hiánya határozza meg,.

Csoport meghatározás ciklonok szerint

A ciklonok szintetikus savópótlók. Műanyag helyettesítőket tartalmaznak ά és β agglutininekhez. Erythrotests "Tsoliklon anti-A" (rózsaszín) és "anti-B" (kék) nevezik őket. A várható agglutináció a vizsgált vér vörösvérsejtjei és a ciklonok agglutininjei között fordul elő.

A technika nem igényli két sorozat használatát, pontosabbnak és megbízhatóbbnak tekinthető. Az eredmények lefolytatása és értékelése ugyanaz, mint az egyszerű standard módszernél.

Ciklonok típusaVércsoport
Agglutinációs eredményAnti-egyAnti-ben
--0 (I)
+-A (II)
-+B (III)
++AB (IV)

Tulajdonság: az AB (IV) negyedik csoportját szükségszerűen megerősíti egy specifikus anti-AB ciklonnal történő agglutinációs reakció és a vörösvértestek nem specifikus adhéziójának hiánya izotóniás nátrium-klorid-oldatban..

Expressz módszer az Erytrotest-csoport kártya használatával

A módszer lehetővé teszi a csoport és az Rh tényező meghatározását laboratóriumi és terepi körülmények között. A készlet lyukakkal ellátott kártyát tartalmaz. Szárított reagenseket már felvittünk a kutak aljára. Itt az „anti-A”, „anti-B” és „anti-AB” mellett az „anti-D” is szerepel, ami az Rh faktor eredményét adja.

Bármilyen formában használhat vért, megfelelő az ujjból vett tartósítószerrel való kapcsolat.

A vizsgálat megkezdése előtt a beteg nevét rögzítik a kártyán, és minden egyes üreghez csepp vizet adnak az összetevők feloldásához. Ezután külön botokkal vért adunk a reagensüreghez és kissé keverjük össze. A végeredmény három perc elteltével „olvasható”.

A vércsoportot mindig ellenőrzik, ha szükséges - transzfúziót. Ugyanakkor a kontrollcsoport és az egyéni kompatibilitás. Valójában sokkal több antigén tulajdonságot találtak az emberi vérben, mint az AB0 rendszerben. Csak a gyengén nyilvánulnak meg a lakosság többségében.

De olyan súlyos betegségben szenvedő betegeknél, akik megváltoztatják a vér tulajdonságait és allergiás a testre, döntő szerepet játszanak, ezeket a vér jelenlétével és szintjével kell figyelembe venni. Ezért a beteg saját csoportjának ismerete növeli a bizalmat a vizsgálat eredményeként.

Keresztvér meghatározás

Az Oroszországban létező vércsoportok meghatározására vonatkozó utasítások jelenleg elavultak, és nem veszik figyelembe a modern transzfusiológia számos eredményét. Az Orosz Orvostudományi Akadémia Hematológiai Tudományos Központjában módszertani ajánlásokat állítanak össze, figyelembe véve a világ-transzfusiológia eredményeit, amelyeket az Egészségügyi Világszervezet és az Amerikai Vérbankok Szövetsége foglal össze. Ezek az iránymutatások az alábbiakban találhatók..

MÓDSZERI AJÁNLÁSOK A VÉR CSOPORTOK MEGHATÁROZÁSÁHOZ


Igazgató jóváhagyta
Hematológiai
RAMS Tudományos Központ
A.I. akadémikus Vorobiev
1999/04/27

Minden ember vére az ABO rendszer négy csoportjába tartozik, attól függően, hogy az A és B antigének a vörösvértesteken vannak-e, valamint a megfelelő anti-A és anti-B antitestek a plazmában vannak. A 0 (1) csoportban mindkét antigén hiányzik, az A (II) csoportban - csak A antigén van jelen a vörösvérsejteken, B (III) csoportban - csak B antigén található a vörösvértesteken és az AB (IV) csoportban - mindkettő egyszerre van jelen a vörösvérsejteken antigén - A és B. A plazmában nem immunizált emberek normál ellenanyagokkal rendelkeznek a hiányzó antigén ellen: a 0 (I) csoportban az A és B antigének elleni antitestek kimutathatók; az A (II) csoportba tartozó személyeknél - anti-B antitestek; a B (III) csoportban az anti-A antitestek és végül az AB (IV) csoportban ennek a rendszernek az ellenanyagai hiányoznak a plazmában. Mivel a vérátömlesztés során a legfontosabb az ABO-rendszerrel való összeegyeztethetőség, az ABO-rendszer vércsoportjának meghatározását keresztmetszeti módszerrel kell meghatározni, azaz vörösvértest antigének és antitestek a plazmában (szérum). A vörösvértestek és a szérum agglutininek antigénjeinek párhuzamos vizsgálata mind a donorok, mind a recipiensek számára kötelező. Vérátömlesztés esetén, a létfontosságú indikációk alapján, a recipiens csoportot csak vörösvértest antigénekkel lehet meghatározni, ugyanakkor megvizsgálják a recipiens szérumának és a donor eritrocitáknak az egyedi kompatibilitását. Nem szabad megfeledkezni arról, hogy vannak mind a B antigén, mind pedig nagyobb mértékben az A antigén fajtái. Az A antigén leggyakoribb fajtái az A1 és A2. Az A2 antigén az A (II) és az AB (IV) csoportba tartozó emberek körülbelül 20% -ánál fordul elő. A rutin gépelés során nincs szükség az A2 (II) és A2B (IV) alcsoportok speciális elosztására, mivel az A2 antigénnel rendelkező embereknek általában nincs antiteste az A1 antigén ellen, és az általános szabályok szerint transzfundálhatók. Az ilyen "felesleges" antitestek jelenlétét a vércsoport kereszt-meghatározásával és a mintában az egyedi kompatibilitási szempontból detektáljuk. Az anti-A1 ellenanyagok előfordulásának gyakorisága 1-8% az A2 (II) csoportba tartozó embereknél és 22-35% az A2B (IV) csoportban. Ha ilyen személyekben anti-A1 ellenanyagokat mutatnak ki, akkor hasznos az A2 antigén jelenlétét speciális reagensekkel (monoklonális reagens A1 antigén vagy Dolichos biflorus lektin ellen) igazolni, amelyek csak A1 vörösvértesteket agglutinálnak. Az A2 (II) és A2B (IV) csoportba tartozó anti-A1 antitestekkel rendelkező egyéneknél a vörösvértestek csak A2 vagy A2B antigénekkel transzfundálhatók..

Az anti-A (alfa) és anti-B (béta) agglutininokat a standard vörösvértestek A1 és B közvetlen agglutinációs reakciójában a teszt szérummal határozzák meg.

A vizsgált vörösvértestek antigénjeit közvetlen agglutinációs reakcióban határozzuk meg, teljes reagensekkel, teljes anti-A és / vagy anti-B antitesteket használva. Ezek a reagensek lehetnek immun donoroktól nyert alloimmun szérumok vagy monoklonális antitestek. Nem immun donoroktól származó isohemagglutináló szérumok használata nem javasolt, mivel ezek nem kielégítő aktivitással bírnak az antigének gyenge variánsaival szemben, és nem standard.

A használt standard reagenseket a nemzetközi követelményeknek megfelelően tanúsítani kell. A szabványok hitelesítését a Hematológiai Tudományos Központ referencialaboratóriuma évente egyszer végzi minden olyan intézménynél, amely tipizáló reagenseket állít elő. A reagens minden egyes tételét ez az intézmény egy szabványosított szabványnak megfelelően szabványosítja. A szabványoknak meg kell felelniük a következő követelményeknek:. pontosíts; 2). legalább 1: 1024 titerrel kell rendelkeznie az A1 és B vörösvértestekkel rendelkező anti-A és anti-B reagensek számára a tesztben; 3). a tesztvizsgálatban legalább 1: 256 titer legyen az anti-A reagensre vörösvértestekkel A; 4). a reagensek mosott A1 vagy B vörösvértestekkel való összekeverése után egyértelmű agglutinációt vált ki a síkon 2-3 másodpercig, és az A2 mosott vörösvértestekkel történő keverés után legkésőbb 5 másodpercig.

A donorok vércsoportját orvos vagy laboratóriumi asszisztens határozza meg kétszer: a donor kezdeti kezelésekor és a donor felvételekor egy alkalommal. Mindkét meghatározás eredményét a donornapló elülső oldalán rögzítik, feltüntetik a dátumot, és azokat a vércsoportot meghatározó személyek írják alá. A jövőben a vércsoportot minden vérellátás előtt meg kell határozni.

A betegek vércsoportját hiteles transzfusiológus vagy speciálisan képzett nővér határozza meg. A vércsoport meghatározásának eredményeit a kórtörténet első oldalának jobb felső sarkában rögzítik, feltüntetve a dátumot, és a meghatározást végző szakember aláírja. A vércsoport meghatározását megismételjük a transzfúzió előtt..

Az ABO-vércsoport meghatározása keresztmetszeti módszerrel.

I. A vörösvérsejt-antigének meghatározása immunpoliklonális szérumokkal vagy monoklonális reagensekkel.

A vérvizsgálatot két sorozat anti-A és anti-B reagenssel, vagy minden reagens egy sorozatával kell elvégezni, ha anti-AB reagenst is használnak, amely kiegészítő ellenőrzés az ABO vércsoport helyes meghatározásának anti-A és anti-B reagensekkel..
A meghatározást jó megvilágítású helyiségben, 15-25 ° C hőmérsékleten hajtják végre. Teljes vér, mosott vörösvértestek, vörösvérsejtek plazma, szérum vagy sóoldat felhasználásával végzett vizsgálathoz.
1. Jelölje meg a táblán vagy a lemezen lévő szakaszokat a reagens nevével.
2. Helyezzen be 1 nagy csepp (kb. 0,1 ml) minden reagenst: anti-A, anti-B és anti-AB.
3. Helyezzen 1 kicsi (kb. 0,03 ml) tesztvért (vörösvértestek) minden reagens mellé.
4. Keverje össze az egyes csepp vért (vörösvértestek) megfelelő reagenssel külön tiszta üvegrudakban..
5. Óvatosan rázza meg a lemezt. Annak ellenére, hogy a standard reagensek használatakor az első másodpercben tiszta agglutináció lép fel, 3 perccel a keverés befejezése után vegye figyelembe a reakció eredményeit, hogy ne hagyja ki az antigének gyenge formáit.
6. Rögzítse a reakció eredményeit közvetlenül a meghatározás után..

II. Az anti-A és anti-B agglutininek meghatározása a vörös szérumban, standard vörösvértestekkel.

Az A1 és B csoport donorainak eritrocitáit szokásos vörösvértestekként kell használni, és a vörösvérsejteket legfeljebb egy hétig tárolják a hűtőszekrényben. Egy speciális tartósítószerben megnövelhető a vörösvértestek eltarthatósági ideje. A lizált vörösvértestek használata nem engedélyezett. Használhat egy előre megadott donor vörösvérsejtjeit (minden csoportra), vagy 2-3 donor vörösvérsejtjeinek keverékét (minden csoportra).
1. Készítsen 5% -os szuszpenziót a vörösvértestek standard oldatának sóoldatában, miután sóoldattal mossuk.
2. Helyezzen 2 csepp teszt szérumot (plazma) 2 jelölt csőbe.
3. Adjunk hozzá 1 csepp A csoport vörösvértestek 5% -os szuszpenzióját az A kémcsőbe, és egy csepp B csoport vörösvértesteket a B kémcsőbe, alaposan keverjük össze és inkubáljuk szobahőmérsékleten 5 percig.
4. Centrifugálja a csöveket 2000 fordulat / perc sebességgel 30 másodpercig (ajánlott az optimális idő és centrifugálási sebesség kiválasztása a használt centrifuga számára, hogy az üledék könnyen elválaszthasson a cső aljától).
5. Rázza meg a csövet, húzza le az aljáról, és óvatosan rázza meg az eritrocita üledéket.
6. Határozza meg az agglutinátumok jelenlétét a cső fényében történő megnézésével..
7. Jegyezze fel a meghatározás eredményeit..

III. Az eredmények értelmezése és vércsoport létrehozása

A vörösvértestek reagensekkel történő reakciójának eredménye:A szérum és a vörösvértestek reakciójának eredménye:A vér a csoporthoz tartozik:
anti-aanti-Banti-ab
---
+-+
-++
+++
A1B
++
-+
+-
--

0 (I)
A (II)
A (III)
AB (IV)

* A pluszjel (+) jelzi az agglutináció jelenlétét, a mínuszjel (-) pedig az agglutináció hiányát jelzi..

IV. Az eltérés az eritrocita antigének és a szérum agglutininek ABO vércsoportjának meghatározása során kapott eredmények között.

Ha a két teszt eredményei nem egyeznek a donorvér vizsgálatakor, akkor ezt a vért nem lehet transzfúzióhoz felhasználni, amíg az eltérés oka nem kerül megállapításra..

Ha az eltérés a fogadó vérére vonatkozik, akinek sürgõs vérátömlesztésre van szüksége, akkor át kell transzfundálnia a 0 (1) csoport vért (vörösvérsejteket), amely összeegyeztethetõ az Rh faktorral..

A hibák fő okai

1. Műszaki hibák: szennyezett berendezések használata; a szérum és a sejtek rossz aránya; túl erős centrifugálás (hamis pozitív); elégtelen centrifugálás (hamis negatív eredmény); a standard reagensek szennyeződése egy másik csoport reagenseivel; a reakció végrehajtása 25 ° C feletti hőmérsékleten (hamis negatív eredmény); a reagensek, a vörösvértestek helytelen címkézése vagy az eredmények helytelen rögzítése.

2. A vizsgált vörösvértestek rendellenes tulajdonságaival kapcsolatos hibák:
- az A antigén gyenge formái (gyakrabban) vagy a B. A szérum tartalmazhat további antitesteket, és a vörösvértestekben a megfelelő antigént nem észlelik. Más vörösvértestek vizsgálatát el kell végezni más reagensorok és más laboratóriumi üvegeszközök felhasználásával. Célszerű többször mosni a vizsgált vörösvértesteket, és a reakció regisztrálási idejét 5 percre növelni. Ha az eredmények nem egyeznek meg az ismételt meghatározással, akkor ezt a vért speciális szerológiai laboratóriumba kell küldeni vizsgálatra..
- eritrociták poliaglutinábilitása, ha az összes ABO reagens ugyanazt az agglutinációt okozza. Ebben az esetben ellenőrizni kell, hogy a vizsgált vörösvértestek agglutinálódnak-e az AB (IV) csoport standard szérumában (ha a tipizálást immunszérumok végezték) vagy a fiziológiás sóoldatban (ha monoklonokat alkalmaztak). A poliaglutinációt általában a vörösvértestek ismételt mosásával lehet kiküszöbölni..
- az „érmeoszlopok” képződését összetéveszthető az agglutinációval. Ebben az esetben, ha 1-2 csepp sóoldatot adunk hozzá és a lemezt megrázják, a hamis agglutináció általában eltűnik..
- vegyes agglutináció (vér-kimérák), amikor a vörösvértestek egy részét agglutinátumban gyűjtik össze, a többi pedig szabadon marad. Ezt leggyakrabban az A, B vagy AB csoport betegeinél figyelik meg, 1-3 hónapon belül a 0. csoport (1) nagy mennyiségű vérátömlesztése vagy a 0. csoport (1) csontvelője átültetése után; ritkábban - heterogén ikrekben. Az alapos történelem gyorsan felfedi ezt a helyzetet..
- újszülött hemolitikus betegségeiben, autoimmun és fertőző betegségekben antitestekkel és / vagy komplementekkel érzékenyített eritrociták. Az ilyen vörösvértestek spontán módon agglutinálódhatnak immunszérumokkal. Ismételje meg a meghatározást monoklonális reagensekkel, végezzen közvetlen Coombs-tesztet (lásd alább).

3. A teszt szérum rendellenes tulajdonságaival kapcsolatos hibák:
- a standard vörösvértestek a teszt szérum jelenlétében érmeoszlopokat képeznek, amelyeket pozitív eredményként lehet figyelembe venni. Ha 1-2 csepp sóoldatot adunk a kémcsőbe, és enyhe hullámozása általában megsemmisíti az érmeoszlopokat, de a valódi agglutinátumok nem. Erősítse meg a reakció abnormális eredményét, ha megismételte azt a 0. sz. Csoport vörösvértestekkel (1).
- a szérumban nincsenek anti-A vagy anti-B antitestek, ezt megfigyelték újszülötteknél, valamint az immunrendszer súlyos rendellenességeivel járó betegeknél. A vércsoportra vonatkozó következtetést a vörösvértestek antigénjeinek eredményei alapján vonják le.
- eltérő specifitású antitestek vagy túlzott antitestek vannak jelen a szérumban (például anti-A1 azoknál az embereknél, akiknek gyenge A2 antigénje van). Ilyen esetekben a kompatibilitási vizsgálat eredménye (lásd a donor és a recipiens egyedi vérkompatibilitási vizsgálatának elvégzésére vonatkozó iránymutatásokat):.

MÓDSZERI AJÁNLÁSOK A VÉRREZZSON Kiegészítők meghatározására

Az emberi vörösvértesteken a rhesus rendszer öt fő antigénje található (D, C, c, E, e), amelyek közül a leginkább immunogén a D antigén [teljes megnevezése Rh 0 (D)]. Ennek az antigénnek a jelenléte vagy hiánya határozza meg a vér Rhesus-affilitását: a D-antigént tartalmazó személyek a Rhesus-pozitív csoportba tartoznak (a fehér faj körülbelül 85% -a); azok a személyek, akik nem tartalmaznak D-antigént, Rh-negatívok (ennek kb. 15% -a).

Más (kisebb) Rh antigének immunogenitása szignifikánsan alacsonyabb, és a következő sorrendben csökken: c> E> C> e. A Rhesus rendszer kisebb antigénjeinek meghatározását általában a vér egyéni szelekciójával hajtják végre többszörös transzfúzióhoz, olyan esetekben, amikor az Rh antigének elleni immun ellenanyagokat mutatnak ki a recipiens szérumában, valamint a fogamzóképes korú nők esetében..

A D antigén gyenge variánsait kombinálva D u csoportba képezik, amely a népesség kb. 1% -a. A vörösvértestek gyengén vagy egyáltalán nem agglutináltak teljes anti-Rh ellenanyagokkal közvetlen agglutinációs reakcióban. Annak meghatározására, hogy nem komplett anti-Rhesus antitesteket kell használni egy antiglobulin reagenssel történő agglutinációs reakcióban (közvetett Coombs-teszt). A véradókat és a recipienseket a D u antigén jelenléte szempontjából különbözik.

A DU-t tartalmazó donorokat Rh-pozitívnak kell osztályozni, mivel a vérnek az Rh-szenzibilizált Rh-negatív recipiensekkel történő transzfúziója súlyos transzfúziós reakciókat válthat ki. A véradókat meg kell vizsgálni a DU jelenléte szempontjából, és ha észlelik, akkor Rh-pozitívnak kell besorolni.

A legtöbb rhesus-negatív egyén dce-fenotípussal rendelkezik, azonban azoknak az egyéneknek a 2-5% -ánál, akik nem hordoznak antigént a vörösvértesteken, és a rhesus-negatív definíció szerint definíció szerint dCe vagy dcE. Az ilyen vörösvértestek immunválaszt okozhatnak, ha a transzfúzióval átkerülnek a dce-csoportba, ezért javasolt az Rh-negatív donorok vérének anti-C és anti-E (vagy anti-CE) reagensekkel való megvizsgálása..

A recipiens vérvizsgálata DU-ra egy közvetett Coombs-tesztben választható.

Rézusvér meghatározása.

A rezushoz való kapcsolódást egy agglutinációs reakcióban határozzuk meg, monoklonális reagensek vagy alloimmun anti-Rh szérumok felhasználásával. A meghatározási módszer a reagens antitestek osztályától függ: ha teljes antitestek vannak jelen (IgM osztály), akkor a reagenst használják az Rh faktor meghatározására sós közegben történő közvetlen agglutinációval; ha nem teljes antitesteket (IgG osztály) tartalmaz, akkor közvetett antiglobulin tesztben, agglutinációs tesztben nagy molekulatömeg-fokozók (albumin, zselatin stb.) jelenlétében, vagy proteolitikus enzimekkel kezelt vörösvértesteknél alkalmazzák..

A Rézushoz való kapcsolódás meghatározására alkalmazott módszertől függetlenül a következő ellenőrzések kötelezőek:
1. standard Rh-pozitív vörösvértestekkel;
2. Standard Rh negatív vörösvértestekkel.

I. Sík-agglutinációs reakció teljes anti-D IgM antitestekkel.

A meghatározást jó megvilágítású helyiségben hajtják végre. A teszt akkor ad a legjobb eredményt, ha nagy koncentrációban vörösvértesteket használnak és körülbelül 37 ° C hőmérsékleten vannak, ezért tanácsos fűtött tálcát használni. Teljes vér, mosott vörösvérsejtek, plazma vörösvérsejtek, szérum, tartósítószer vagy sóoldat felhasználásával végzett vizsgálathoz.

a) Tegyen egy nagy csepp (kb. 0,1 ml) reagenst egy tányérra vagy tablettára.
b) Tegyen egy kis csepp (kb. 0,03 ml) tesztvér (vörösvértestek) mellé..
c) Alaposan keverje össze a reagenst a vérrel egy tiszta üvegrúddal.
d) 10-20 másodperc után óvatosan rázza meg a lemezt. Noha az első 30 másodpercben tiszta agglutináció lép fel, fontolja meg a reakció eredményét 3 perccel a keverés után.
d) Rögzítse a reakció eredményeit közvetlenül a meghatározás után.

Agglutináció jelenlétében a vizsgálati vért Rh-pozitívnak kell jelölni. Ha az agglutináció nagyon gyenge vagy hiányzik, a donorokat egy második, IgG (nem teljes) anti-D ellenanyagokat tartalmazó reagenssel kell megvizsgálni (lásd a III. Pontot) annak meghatározására, hogy ez a vérminta a D u csoporthoz tartozik-e. A recipiensekben a DU kimutatása nem teljes antitestekkel nem szükséges. Nem szabad megfeledkezni arról, hogy a síkon lévő gyenge agglutináció megfigyelhető a vörösvértestekkel D u C e. Az ilyen befogadót nem szabad transzfundálni Rh-negatív vérrel, mivel ez szenzibilizációhoz vezethet a „c” antigén ellen. Ebben az esetben tanácsos ellenőrizni, hogy van-e C antigén a recipiensben.

II. Agglutinációs reakció hiányos IgG anti-D ellenanyagokkal nagy molekulatömegű adalékanyagok jelenlétében.

A reakciót vagy egy speciálisan előkészített reagenssel hajthatjuk végre, amely már tartalmaz erősítőt (univerzális reagens poliglicinnel vagy albuminnal a síkban), vagy hozzáadjuk az erősítőt a reakció során (konglutációs reakció zselatinnal in vitro)..

1. Az agglutinációs reakció síkban történő beállításának módszere nem különbözik az (1) bekezdésben ismertetett módszertől. Ugyanakkor az univerzális reagensek hamis pozitív reakciót adhatnak az Rh negatív vörösvértestekkel a nagy molekulatömegű anyaguk miatt, és eltérő antitestekkel bevont vörösvértestek agglutinációját is okozhatják (nem anti Rézus) sajátossága. Ezért párhuzamos teszteket kell végezni az alkalmazott erősítő kontroll oldatával, de anti-D ellenanyagok nélkül. Ha a kontroll oldat vörösvértestek agglutinációját okozza, akkor a teszt eredménye nem megbízható. A meghatározást ismételje meg egy másik reagenssel.

2. A konglutációs reakció zselatin alkalmazásával. Monoklonális reagensek és szokásos hiányos antitestekkel rendelkező izoimmun anti-rezus szérum alkalmazhatók erre a tesztre. Ellenőrzést kell végezni zselatin oldattal, anélkül, hogy Rhesus anti-reagenst tartalmazna.

a) Pipettázzunk 1 csepp (kb. 0,05 ml) vizsgálati vért vagy vörösvértestek szuszpenzióját (kb. 50%).
b) Adjunk hozzá 2 csepp (0,1 ml) 10% -os zselatin oldatot, előmelegítve 46-48 ° C-on, hogy cseppfolyósítsuk..
c) Adjunk hozzá 2 csepp (0,1 ml) anti-D reagenst és keverjük össze.
d) Helyezze a csövet vízfürdőbe 46-48 ° C hőmérsékleten 5-10 percre, vagy száraz levegő termosztátba ugyanazon a hőmérsékleten 30 percre..
e) Öntsen 5-8 ml fiziológiás sóoldatot a kémcsőbe, és óvatosan fordítsa meg az dugóval lezárt csövet 1-2 alkalommal a keveréshez.
f) Határozzuk meg az agglutinátumok jelenlétét szabad szemmel vagy a nagyítón keresztül.
g) Az eredményeket azonnal rögzítse..

Pozitív eredménnyel az agglutinátumok megkülönböztethetők különböző méretű aggregátumok formájában átlátszó háttérrel - a vér Rh-pozitív. Negatív eredmény esetén a kémcsőben nincs aggregátum, és látható a vörösvértestek egyenletes színű, átlátszatlan szuszpenziója - a vér Rh-negatív. Ha finomszemcsés kétes agglutinációt észlelnek, akkor a vért indirekt antiglobulin-teszttel kell megvizsgálni (lásd a III. Bekezdést). A zselatin teszt eredményei csak akkor megbízhatók, ha maga a zselatin nem okoz a vizsgált vörösvértestek agglutinációját, és a standard vörösvértestekkel végzett kontroll eredményei a vártnak felelnek meg. Nem megfelelő eredmények esetén a Rhesus-kapcsolat meghatározását meg kell ismételni egy másik reagenssel vagy egy másik zselatin mintával. Ha a zselatin önmagában okozza a vizsgált vörösvértestek agglutinációját, akkor feltételezhetjük, hogy anti-Rhesus antitestek vagy más fajlagosságuk van-e rajtuk (ez megfigyelhető újszülött hemolitikus betegsége, autoimmun hemolitikus anémia és néhány fertőző betegség esetén). Ebben az esetben a vért vizsgálatra kell küldeni egy speciális szerológiai laboratóriumba.

III. Indirekt antiglobulin-teszt (közvetett Coombs-teszt) nem teljes anti-D ellenanyagok felhasználásával.

a) Készítsen 2-5% -os vörösvértestek szuszpenzióját, háromszor mossuk fiziológiás sóoldatban. Ehhez tegyen 5 csepp (körülbelül 0,25 ml) tesztvért egy kémcsőbe, mosson háromszor 5-10 ml fiziológiás sóoldatban; szuszpendáljuk az eritrociták üledékét 2-3 ml fiziológiás sóoldatban, vagy lehetőleg 2-3 ml alacsony ionerősségű oldatban - LISS, amelyben a vörösvértestek elleni antitestek kötődése erősebb és gyorsabb, mint a fiziológiás sóoldatban.
b) Pipettázzunk 1 csepp anti-D reagenst egy tiszta, címkézett csőbe.
c) Adjon hozzá 1 csepp 2-5% -os vörösvértestek szuszpenzióját ("a" bekezdés).
d) Inkubálja a keveréket 37 ° C-on 30-45 percig (ha a vörösvértestek sóoldatban vannak) vagy 10-15 percig (ha a vörösvértestek LISS-ben vannak).
e) Mossuk le a vörösvérsejteket egyszer (monoklonális reagens használata esetén) vagy 3-szor (immun-anti-D szérum alkalmazása esetén) nagy mennyiségű (5-10 ml) fiziológiás sóoldattal. Az egyszeri mosás csak monoklonális reagensek használata esetén megengedett. Távolítsa el a sóoldatot teljesen.
f) Adjunk hozzá 1 csepp antiglobulin reagenst a csapadékhoz és alaposan keverjük össze.
g) Centrifugáljuk 15-20 másodpercig 900-1000 g sebességgel (körülbelül 2000-3000 ford / perc).
h) Finoman szuszpendáljuk újra a pellettet, és szemrevételezéssel ellenőrizzük az agglutináció jelenlétét.
i) Azonnal rögzítse a meghatározás eredményeit.

Agglutináció hiányában a vért Rh-negatívnak, pozitív reakcióval - Rh-pozitívnak kell tekinteni; a D u alcsoportjai gyenge agglutinációt okozhatnak még ebben a nagyon érzékeny vizsgálatban. Mielőtt a donor D u-t Rh-pozitívnak rendeli, ellenőrizze a következtetést az antiglobulin szérum kontroll Rh-negatív vörösvértestekkel végzett kontroll vizsgálatával. Ha a kontrollteszt pozitív, az értelmezés nem megbízható, és egy ilyen donor vérét nem szabad a transzfúzióhoz felhasználni, amíg a rézis-kapcsolatának végső meghatározása megtörténik..

IV. Proteolitikus enzimekkel kezelt vörösvérsejtek agglutinációja hiányos anti-D ellenanyagok felhasználásával.

A hiányos antitestek közvetlen agglutinációt okozhatnak a bromelinnel, papainnal, tripszinnel és más proteázokkal kezelt eritrociták sóközegében. Ez a módszer nagyon érzékeny és megbízható a D antigén gyenge formáinak kimutatására. Elsősorban a vércsoportok automatikus meghatározására használják a Gruppomatik típusú rendszerekben, amelyekben a vörösvértestek szokásos enzimekkel történő feldolgozása biztosított, és a szükséges reagenshígítást külön választják meg, mivel a próba jelenség (a túlzott antitestek általi agglutináció gátlása) jellemzi ezt a tesztet. A vércsoportok kézi meghatározásával a módszer speciális szerológiai laboratóriumokban alkalmazható különféle módosításokkal, ami nem teszi lehetővé annak teljes leírását ezen iránymutatásokban.

MÓDSZERI AJÁNLÁSOK A VÉRDONOR ÉS A VEGYESÍTŐ SZERETÉNEK INDIVIDÁLIS KOMPATATIVITÁSÁNAK VÁSÁRLÁSA

Az egyéni kompatibilitási teszt célja a vörösvérsejtek transzfúziójának megakadályozása, amelyek összeegyeztethetetlenek a beteg szérumával. A recipiens szérumnak a tervezett donor vörösvértesteivel történő tesztelése a legmegbízhatóbb módszer az ellenanyagok azonosítására, amelyek károsíthatják a transzfundált vörösvértesteket, az átültetés utáni reakciókat, beleértve a hemolitikusokat. Az ilyen teszt elvégzése lehetővé teszi: 1) megerősíteni az adományozó és a recipiens ABO-kompatibilitását; 2) a donor eritrocita antigének elleni antitest jelenlétének azonosítása a recipiens szérumában.

Egyéni kompatibilitási tesztelési technika.

Minden esetben, kivéve a sürgõs transzfúziókat, a tesztet két szakaszban kell elvégezni: az elsõ - antiglobulin-reagens használata nélkül, a második - antiglobulin-reagenssel vagy zselatin felhasználásával. Zselatin használata esetén a módszer kevésbé érzékeny. Sürgõ transzfúziók esetén kétlépéses meghatározást javasolunk alacsony ionerõsségû (LISS) oldattal..

1. Helyezzen 2 csepp recipiens szérumot egy jelölt csőbe.
2. Adjon hozzá 1 csepp 5% -os szuszpenziót háromszor mosott donor eritrocitákból sóoldatban vagy alacsony ionerősségű LISS oldatban (az ellenanyag rögzítése jobb az alacsony ionerősségű közegben, ezért célszerű a vörösvértesteket LISS oldatban mérni, amelyet általában a gyártó szállít az antiglobulin reagenssel)..
3. Azonnal centrifugálja 2000 fordulat / perc sebességgel 15-20 másodpercig.
4. Vizsgálja meg a felülúszót hemolízis szempontjából. Finoman rázva a csövet, válassza le a sejtpelletet a cső aljától és ellenőrizze, hogy vannak-e agglutinátumok. A hemolízis és / vagy agglutinációk jelenléte ebben a szakaszban a következőket jelentheti: a) összeférhetetlenség az ABO rendszerben; b) nem ABO-specifitású, szobahőmérsékleten aktív antitestek jelenléte a szérumban a szérumban (anti-S, anti-P1, anti-M stb.).

A második szakasz antiglobulin reagenssel

5. Ha nincs hemolízis, és a csövek rázása után a vörösvértestek homogén szuszpenziót képeznek, inkubáljuk a csövet 30-45 percig (LISS használatával, az inkubációs idő 10-15 perc) 37 ° C-on..
6. Centrifugáljuk a csövet a 3. lépésben leírtak szerint, és vizsgáljuk meg a felülúszót hemolízis és agglutináció szempontjából. A hemolízis és / vagy agglutinációk jelenléte (a csövek rázása után) azt jelzi, hogy a recipiensben teljes donorvörösvérsejtek elleni termikus antitestek vannak jelen a befogadóban..
7. Ha nincs hemolízis és agglutináció, mossa le a vörösvértesteket 3-4-szer nagy mennyiségű (legalább 5 ml) sóoldattal (a nem megfelelő mosás az antiglobulin reagens szérummaradékkal történő inaktiválódásához vezethet, és téves negatív eredményt eredményezhet); az utolsó mosás után teljesen távolítsa el a sóoldatot.
8. Adjunk hozzá 1-2 csepp antiglobulin szérumot és alaposan keverjük össze.
9. Centrifugáljuk a csövet a 3. lépés szerint, óvatosan szakítsuk meg a pellettet és nézzük meg a csövet az agglutinációk szempontjából.
Az antiglobulin reagens minőségét a gyártó garantálja. Ne használjon lejárt reagenst vagy ismételt fagyasztás-olvasztás után. Kontrollként (ha kétségei vannak a reagens minőségével kapcsolatban) hasznos antiglobulin-teszt elvégzése a standard Rh-pozitív és Rh-negatív vörösvértestekkel (lásd: Útmutató a vér rézusos rokonságának meghatározásához)..

A második lépés zselatin használatakor

5. Ha nincs hemolízis, és a csövek rázása után a vörösvértestek homogén szuszpenziót képeznek, adjunk hozzá 2 csepp 10% -os zselatin oldatot, felmelegítjük, hogy cseppfolyósuljon, és alaposan keverjük össze..
6. Inkubálja a csövet 46-48 ° C-on 10 percig vízfürdőben vagy 30 percig száraz levegő termosztátban.
7. Adjon hozzá 5-8 ml sóoldatot, és óvatosan csukja le a zárt csövet, hogy 1-2-szer keverje.
8. Az agglutinációt szabad szemmel vagy a nagyítón keresztül a csőre nézzen..

Ne használjon zselatint, ha az nem fagy le a hűtőszekrényben, zavaros vagy pehelyeket képez. Nem fagyasztható a zselatin. A zselatin oldat nem okozhat nem specifikus agglutinációt, ezért minden zselatin sorozatot ellenőrizni kell nem szenzibilizált vörösvértestekkel.

Ha sürgõs transzfúzióra van szükség, akkor csak a kompatibilitási teszt 1-4. Szakaszára lehet korlátozódni. Ebben az esetben is lehetséges egy egyéni kompatibilitási vizsgálat elvégzése síkon úgy, hogy 1 csepp recipiens szérumot és egy csepp donor eritrocitát összekeverünk (a szérum és a vér arányának kb. 5: 1-nek kell lennie). Ebben az állításban az egyéni kompatibilitási teszt valójában csak az ABO rendszerben található kompatibilitás azonosítására korlátozódik.

A donor akkor tekinthető kompatibilisnek, ha sem az egyedi kompatibilitási teszt egyik szakaszában sem hemolízist, sem agglutinációt nem figyelnek meg. Jelenlétük jelzi az állítólagos donor vörösvérsejtjeivel szembeni ellenanyagok jelenlétét a szérumban. Az ilyen betegeknek át kell adniuk a vörösvérsejteket, amelyek nem tartalmazzák azokat az antigéneket, amelyek ellen az ellenanyagok irányulnak. Emlékeztetni kell arra, hogy az egyedi kompatibilitási teszt nem ad információt az ellenanyagok specifitásáról a recipiens szérumában. Sajátosságukat csak tipizált vörösvértestekkel végzett vizsgálatok során lehet megállapítani..

MÓDSZERI INFORMÁCIÓK
Az Oroszországban létező vércsoportok meghatározására vonatkozó utasítások jelenleg elavultak, és nem veszik figyelembe a modern transzfusiológia számos eredményét. Az Orosz Orvostudományi Akadémia Hematológiai Tudományos Központjában módszertani ajánlásokat állítanak össze, figyelembe véve a világ-transzfusiológia eredményeit, amelyeket az Egészségügyi Világszervezet és az Amerikai Vérbankok Szövetsége foglal össze. Ezek az iránymutatások az alábbiakban találhatók..
MÓDSZERI AJÁNLÁSOK A VÉR CSOPORTOK MEGHATÁROZÁSÁHOZ
Igazgató jóváhagyta
Hematológiai
RAMS Tudományos Központ
A.I. akadémikus Vorobiev
1999/04/27

Minden ember vére az ABO rendszer négy csoportjába tartozik, attól függően, hogy az A és B antigének a vörösvértesteken vannak-e, valamint a megfelelő anti-A és anti-B antitestek a plazmában vannak. A 0 (1) csoportban mindkét antigén hiányzik, az A (II) csoportban - csak A antigén van jelen a vörösvérsejteken, B (III) csoportban - csak B antigén található a vörösvértesteken és az AB (IV) csoportban - mindkettő egyszerre van jelen a vörösvérsejteken antigén - A és B. A plazmában nem immunizált emberek normál ellenanyagokkal rendelkeznek a hiányzó antigén ellen: a 0 (I) csoportban az A és B antigének elleni antitestek kimutathatók; az A (II) csoportba tartozó személyeknél - anti-B antitestek; a B (III) csoportban az anti-A antitestek és végül az AB (IV) csoportban ennek a rendszernek az ellenanyagai hiányoznak a plazmában. Mivel a vérátömlesztés során a legfontosabb az ABO-rendszerrel való összeegyeztethetőség, az ABO-rendszer vércsoportjának meghatározását keresztmetszeti módszerrel kell meghatározni, azaz vörösvértest antigének és antitestek a plazmában (szérum). A vörösvértestek és a szérum agglutininek antigénjeinek párhuzamos vizsgálata mind a donorok, mind a recipiensek számára kötelező. Vérátömlesztés esetén, a létfontosságú indikációk alapján, a recipiens csoportot csak vörösvértest antigénekkel lehet meghatározni, ugyanakkor megvizsgálják a recipiens szérumának és a donor eritrocitáknak az egyedi kompatibilitását. Nem szabad megfeledkezni arról, hogy vannak mind a B antigén, mind pedig nagyobb mértékben az A antigén fajtái. Az A antigén leggyakoribb fajtái az A1 és A2. Az A2 antigén az A (II) és az AB (IV) csoportba tartozó emberek körülbelül 20% -ánál fordul elő. A rutin gépelés során nincs szükség az A2 (II) és A2B (IV) alcsoportok speciális elosztására, mivel az A2 antigénnel rendelkező embereknek általában nincs antiteste az A1 antigén ellen, és az általános szabályok szerint transzfundálhatók. Az ilyen "felesleges" antitestek jelenlétét a vércsoport kereszt-meghatározásával és a mintában az egyedi kompatibilitási szempontból detektáljuk. Az anti-A1 ellenanyagok előfordulásának gyakorisága 1-8% az A2 (II) csoportba tartozó embereknél és 22-35% az A2B (IV) csoportban. Ha ilyen személyekben anti-A1 ellenanyagokat mutatnak ki, akkor hasznos az A2 antigén jelenlétét speciális reagensekkel (monoklonális reagens A1 antigén vagy Dolichos biflorus lektin ellen) igazolni, amelyek csak A1 vörösvértesteket agglutinálnak. Az A2 (II) és A2B (IV) csoportba tartozó anti-A1 antitestekkel rendelkező egyéneknél a vörösvértestek csak A2 vagy A2B antigénekkel transzfundálhatók..

Az anti-A (alfa) és anti-B (béta) agglutininokat a standard vörösvértestek A1 és B közvetlen agglutinációs reakciójában a teszt szérummal határozzák meg.

A vizsgált vörösvértestek antigénjeit közvetlen agglutinációs reakcióban határozzuk meg, teljes reagensekkel, teljes anti-A és / vagy anti-B antitesteket használva. Ezek a reagensek lehetnek immun donoroktól nyert alloimmun szérumok vagy monoklonális antitestek. Nem immun donoroktól származó isohemagglutináló szérumok használata nem javasolt, mivel ezek nem kielégítő aktivitással bírnak az antigének gyenge variánsaival szemben, és nem standard.

A használt standard reagenseket a nemzetközi követelményeknek megfelelően tanúsítani kell. A szabványok hitelesítését a Hematológiai Tudományos Központ referencialaboratóriuma évente egyszer végzi minden olyan intézménynél, amely tipizáló reagenseket állít elő. A reagens minden egyes tételét ez az intézmény egy szabványosított szabványnak megfelelően szabványosítja. A szabványoknak meg kell felelniük a következő követelményeknek:. pontosíts; 2). legalább 1: 1024 titerrel kell rendelkeznie az A1 és B vörösvértestekkel rendelkező anti-A és anti-B reagensek számára a tesztben; 3). a tesztvizsgálatban legalább 1: 256 titer legyen az anti-A reagensre vörösvértestekkel A; 4). a reagensek mosott A1 vagy B vörösvértestekkel való összekeverése után egyértelmű agglutinációt vált ki a síkon 2-3 másodpercig, és az A2 mosott vörösvértestekkel történő keverés után legkésőbb 5 másodpercig.

A donorok vércsoportját orvos vagy laboratóriumi asszisztens határozza meg kétszer: a donor kezdeti kezelésekor és a donor felvételekor egy alkalommal. Mindkét meghatározás eredményét a donornapló elülső oldalán rögzítik, feltüntetik a dátumot, és azokat a vércsoportot meghatározó személyek írják alá. A jövőben a vércsoportot minden vérellátás előtt meg kell határozni.

A betegek vércsoportját hiteles transzfusiológus vagy speciálisan képzett nővér határozza meg. A vércsoport meghatározásának eredményeit a kórtörténet első oldalának jobb felső sarkában rögzítik, feltüntetve a dátumot, és a meghatározást végző szakember aláírja. A vércsoport meghatározását megismételjük a transzfúzió előtt..
Az ABO-vércsoport meghatározása keresztmetszeti módszerrel.

I. A vörösvérsejt-antigének meghatározása immunpoliklonális szérumokkal vagy monoklonális reagensekkel.

A vérvizsgálatot két sorozat anti-A és anti-B reagenssel, vagy minden reagens egy sorozatával kell elvégezni, ha anti-AB reagenst is használnak, amely kiegészítő ellenőrzés az ABO vércsoport helyes meghatározásának anti-A és anti-B reagensekkel..
A meghatározást jó megvilágítású helyiségben, 15-25 ° C hőmérsékleten hajtják végre. Teljes vér, mosott vörösvértestek, vörösvérsejtek plazma, szérum vagy sóoldat felhasználásával végzett vizsgálathoz.
1. Jelölje meg a táblán vagy a lemezen lévő szakaszokat a reagens nevével.
2. Helyezzen be 1 nagy csepp (kb. 0,1 ml) minden reagenst: anti-A, anti-B és anti-AB.
3. Helyezzen 1 kicsi (kb. 0,03 ml) tesztvért (vörösvértestek) minden reagens mellé.
4. Keverje össze az egyes csepp vért (vörösvértestek) megfelelő reagenssel külön tiszta üvegrudakban..
5. Óvatosan rázza meg a lemezt. Annak ellenére, hogy a standard reagensek használatakor az első másodpercben tiszta agglutináció lép fel, 3 perccel a keverés befejezése után vegye figyelembe a reakció eredményeit, hogy ne hagyja ki az antigének gyenge formáit.
6. Rögzítse a reakció eredményeit közvetlenül a meghatározás után..

II. Az anti-A és anti-B agglutininek meghatározása a vörös szérumban, standard vörösvértestekkel.

Az A1 és B csoport donorainak eritrocitáit szokásos vörösvértestekként kell használni, és a vörösvérsejteket legfeljebb egy hétig tárolják a hűtőszekrényben. Egy speciális tartósítószerben megnövelhető a vörösvértestek eltarthatósági ideje. A lizált vörösvértestek használata nem engedélyezett. Használhat egy előre megadott donor vörösvérsejtjeit (minden csoportra), vagy 2-3 donor vörösvérsejtjeinek keverékét (minden csoportra).
1. Készítsen 5% -os szuszpenziót a vörösvértestek standard oldatának sóoldatában, miután sóoldattal mossuk.
2. Helyezzen 2 csepp teszt szérumot (plazma) 2 jelölt csőbe.
3. Adjunk hozzá 1 csepp A csoport vörösvértestek 5% -os szuszpenzióját az A kémcsőbe, és egy csepp B csoport vörösvértesteket a B kémcsőbe, alaposan keverjük össze és inkubáljuk szobahőmérsékleten 5 percig.
4. Centrifugálja a csöveket 2000 fordulat / perc sebességgel 30 másodpercig (ajánlott az optimális idő és centrifugálási sebesség kiválasztása a használt centrifuga számára, hogy az üledék könnyen elválaszthasson a cső aljától).
5. Rázza meg a csövet, húzza le az aljáról, és óvatosan rázza meg az eritrocita üledéket.
6. Határozza meg az agglutinátumok jelenlétét a cső fényében történő megnézésével..
7. Jegyezze fel a meghatározás eredményeit..

III. Az eredmények értelmezése és vércsoport létrehozása

A vörösvértestek reagensekkel történő reakciójának eredménye:A szérum és a vörösvértestek reakciójának eredménye:A vér a csoporthoz tartozik:
anti-aanti-Banti-ab
---
+-+
-++
+++
A1B
++
-+
+-
--

0 (I)
A (II)
A (III)
AB (IV)

* A pluszjel (+) jelzi az agglutináció jelenlétét, a mínuszjel (-) pedig az agglutináció hiányát jelzi..

IV. Az eltérés az eritrocita antigének és a szérum agglutininek ABO vércsoportjának meghatározása során kapott eredmények között.

Ha a két teszt eredményei nem egyeznek a donorvér vizsgálatakor, akkor ezt a vért nem lehet transzfúzióhoz felhasználni, amíg az eltérés oka nem kerül megállapításra..

Ha az eltérés a fogadó vérére vonatkozik, akinek sürgõs vérátömlesztésre van szüksége, akkor át kell transzfundálnia a 0 (1) csoport vért (vörösvérsejteket), amely összeegyeztethetõ az Rh faktorral..

A hibák fő okai

1. Műszaki hibák: szennyezett berendezések használata; a szérum és a sejtek rossz aránya; túl erős centrifugálás (hamis pozitív); elégtelen centrifugálás (hamis negatív eredmény); a standard reagensek szennyeződése egy másik csoport reagenseivel; a reakció végrehajtása 25 ° C feletti hőmérsékleten (hamis negatív eredmény); a reagensek, a vörösvértestek helytelen címkézése vagy az eredmények helytelen rögzítése.

2. A vizsgált vörösvértestek rendellenes tulajdonságaival kapcsolatos hibák:
- az A antigén gyenge formái (gyakrabban) vagy a B. A szérum tartalmazhat további antitesteket, és a vörösvértestekben a megfelelő antigént nem észlelik. Más vörösvértestek vizsgálatát el kell végezni más reagensorok és más laboratóriumi üvegeszközök felhasználásával. Célszerű többször mosni a vizsgált vörösvértesteket, és a reakció regisztrálási idejét 5 percre növelni. Ha az eredmények nem egyeznek meg az ismételt meghatározással, akkor ezt a vért speciális szerológiai laboratóriumba kell küldeni vizsgálatra..
- eritrociták poliaglutinábilitása, ha az összes ABO reagens ugyanazt az agglutinációt okozza. Ebben az esetben ellenőrizni kell, hogy a vizsgált vörösvértestek agglutinálódnak-e az AB (IV) csoport standard szérumában (ha a tipizálást immunszérumok végezték) vagy a fiziológiás sóoldatban (ha monoklonokat alkalmaztak). A poliaglutinációt általában a vörösvértestek ismételt mosásával lehet kiküszöbölni..
- az „érmeoszlopok” képződését összetéveszthető az agglutinációval. Ebben az esetben, ha 1-2 csepp sóoldatot adunk hozzá és a lemezt megrázják, a hamis agglutináció általában eltűnik..
- vegyes agglutináció (vér-kimérák), amikor a vörösvértestek egy részét agglutinátumban gyűjtik össze, a többi pedig szabadon marad. Ezt leggyakrabban az A, B vagy AB csoport betegeinél figyelik meg, 1-3 hónapon belül a 0. csoport (1) nagy mennyiségű vérátömlesztése vagy a 0. csoport (1) csontvelője átültetése után; ritkábban - heterogén ikrekben. Az alapos történelem gyorsan felfedi ezt a helyzetet..
- újszülött hemolitikus betegségeiben, autoimmun és fertőző betegségekben antitestekkel és / vagy komplementekkel érzékenyített eritrociták. Az ilyen vörösvértestek spontán módon agglutinálódhatnak immunszérumokkal. Ismételje meg a meghatározást monoklonális reagensekkel, végezzen közvetlen Coombs-tesztet (lásd alább).

3. A teszt szérum rendellenes tulajdonságaival kapcsolatos hibák:
- a standard vörösvértestek a teszt szérum jelenlétében érmeoszlopokat képeznek, amelyeket pozitív eredményként lehet figyelembe venni. Ha 1-2 csepp sóoldatot adunk a kémcsőbe, és enyhe hullámozása általában megsemmisíti az érmeoszlopokat, de a valódi agglutinátumok nem. Erősítse meg a reakció abnormális eredményét, ha megismételte azt a 0. sz. Csoport vörösvértestekkel (1).
- a szérumban nincsenek anti-A vagy anti-B antitestek, ezt megfigyelték újszülötteknél, valamint az immunrendszer súlyos rendellenességeivel járó betegeknél. A vércsoportra vonatkozó következtetést a vörösvértestek antigénjeinek eredményei alapján vonják le.
- eltérő specifitású antitestek vagy túlzott antitestek vannak jelen a szérumban (például anti-A1 azoknál az embereknél, akiknek gyenge A2 antigénje van). Ilyen esetekben a kompatibilitási vizsgálat eredménye (lásd a donor és a recipiens egyedi vérkompatibilitási vizsgálatának elvégzésére vonatkozó iránymutatásokat):.

MÓDSZERI AJÁNLÁSOK A VÉRREZZSON Kiegészítők meghatározására

Az emberi vörösvértesteken a rhesus rendszer öt fő antigénje található (D, C, c, E, e), amelyek közül a leginkább immunogén a D antigén [teljes megnevezése Rh 0 (D)]. Ennek az antigénnek a jelenléte vagy hiánya határozza meg a vér Rhesus-affilitását: a D-antigént tartalmazó személyek a Rhesus-pozitív csoportba tartoznak (a fehér faj körülbelül 85% -a); azok a személyek, akik nem tartalmaznak D-antigént, Rh-negatívok (ennek kb. 15% -a).

Más (kisebb) Rh antigének immunogenitása szignifikánsan alacsonyabb, és a következő sorrendben csökken: c> E> C> e. A Rhesus rendszer kisebb antigénjeinek meghatározását általában a vér egyéni szelekciójával hajtják végre többszörös transzfúzióhoz, olyan esetekben, amikor az Rh antigének elleni immun ellenanyagokat mutatnak ki a recipiens szérumában, valamint a fogamzóképes korú nők esetében..

A D antigén gyenge variánsait kombinálva D u csoportba képezik, amely a népesség kb. 1% -a. A vörösvértestek gyengén vagy egyáltalán nem agglutináltak teljes anti-Rh ellenanyagokkal közvetlen agglutinációs reakcióban. Annak meghatározására, hogy nem komplett anti-Rhesus antitesteket kell használni egy antiglobulin reagenssel történő agglutinációs reakcióban (közvetett Coombs-teszt). A véradókat és a recipienseket a D u antigén jelenléte szempontjából különbözik.

A DU-t tartalmazó donorokat Rh-pozitívnak kell osztályozni, mivel a vérnek az Rh-szenzibilizált Rh-negatív recipiensekkel történő transzfúziója súlyos transzfúziós reakciókat válthat ki. A véradókat meg kell vizsgálni a DU jelenléte szempontjából, és ha észlelik, akkor Rh-pozitívnak kell besorolni.

A legtöbb rhesus-negatív egyén dce-fenotípussal rendelkezik, azonban azoknak az egyéneknek a 2-5% -ánál, akik nem hordoznak antigént a vörösvértesteken, és a rhesus-negatív definíció szerint definíció szerint dCe vagy dcE. Az ilyen vörösvértestek immunválaszt okozhatnak, ha a transzfúzióval átkerülnek a dce-csoportba, ezért javasolt az Rh-negatív donorok vérének anti-C és anti-E (vagy anti-CE) reagensekkel való megvizsgálása..

A recipiens vérvizsgálata DU-ra egy közvetett Coombs-tesztben választható.

Rézusvér meghatározása.

A rezushoz való kapcsolódást egy agglutinációs reakcióban határozzuk meg, monoklonális reagensek vagy alloimmun anti-Rh szérumok felhasználásával. A meghatározási módszer a reagens antitestek osztályától függ: ha teljes antitestek vannak jelen (IgM osztály), akkor a reagenst használják az Rh faktor meghatározására sós közegben történő közvetlen agglutinációval; ha nem teljes antitesteket (IgG osztály) tartalmaz, akkor közvetett antiglobulin tesztben, agglutinációs tesztben nagy molekulatömeg-fokozók (albumin, zselatin stb.) jelenlétében, vagy proteolitikus enzimekkel kezelt vörösvértesteknél alkalmazzák..

A Rézushoz való kapcsolódás meghatározására alkalmazott módszertől függetlenül a következő ellenőrzések kötelezőek:
1. standard Rh-pozitív vörösvértestekkel;
2. Standard Rh negatív vörösvértestekkel.

I. Sík-agglutinációs reakció teljes anti-D IgM antitestekkel.

A meghatározást jó megvilágítású helyiségben hajtják végre. A teszt akkor ad a legjobb eredményt, ha nagy koncentrációban vörösvértesteket használnak és körülbelül 37 ° C hőmérsékleten vannak, ezért tanácsos fűtött tálcát használni. Teljes vér, mosott vörösvérsejtek, plazma vörösvérsejtek, szérum, tartósítószer vagy sóoldat felhasználásával végzett vizsgálathoz.

a) Tegyen egy nagy csepp (kb. 0,1 ml) reagenst egy tányérra vagy tablettára.
b) Tegyen egy kis csepp (kb. 0,03 ml) tesztvér (vörösvértestek) mellé..
c) Alaposan keverje össze a reagenst a vérrel egy tiszta üvegrúddal.
d) 10-20 másodperc után óvatosan rázza meg a lemezt. Noha az első 30 másodpercben tiszta agglutináció lép fel, fontolja meg a reakció eredményét 3 perccel a keverés után.
d) Rögzítse a reakció eredményeit közvetlenül a meghatározás után.

Agglutináció jelenlétében a vizsgálati vért Rh-pozitívnak kell jelölni. Ha az agglutináció nagyon gyenge vagy hiányzik, a donorokat egy második, IgG (nem teljes) anti-D ellenanyagokat tartalmazó reagenssel kell megvizsgálni (lásd a III. Pontot) annak meghatározására, hogy ez a vérminta a D u csoporthoz tartozik-e. A recipiensekben a DU kimutatása nem teljes antitestekkel nem szükséges. Nem szabad megfeledkezni arról, hogy a síkon lévő gyenge agglutináció megfigyelhető a vörösvértestekkel D u C e. Az ilyen befogadót nem szabad transzfundálni Rh-negatív vérrel, mivel ez szenzibilizációhoz vezethet a „c” antigén ellen. Ebben az esetben tanácsos ellenőrizni, hogy van-e C antigén a recipiensben.

II. Agglutinációs reakció hiányos IgG anti-D ellenanyagokkal nagy molekulatömegű adalékanyagok jelenlétében.

A reakciót vagy egy speciálisan előkészített reagenssel hajthatjuk végre, amely már tartalmaz erősítőt (univerzális reagens poliglicinnel vagy albuminnal a síkban), vagy hozzáadjuk az erősítőt a reakció során (konglutációs reakció zselatinnal in vitro)..

1. Az agglutinációs reakció síkban történő beállításának módszere nem különbözik az (1) bekezdésben ismertetett módszertől. Ugyanakkor az univerzális reagensek hamis pozitív reakciót adhatnak az Rh negatív vörösvértestekkel a nagy molekulatömegű anyaguk miatt, és eltérő antitestekkel bevont vörösvértestek agglutinációját is okozhatják (nem anti Rézus) sajátossága. Ezért párhuzamos teszteket kell végezni az alkalmazott erősítő kontroll oldatával, de anti-D ellenanyagok nélkül. Ha a kontroll oldat vörösvértestek agglutinációját okozza, akkor a teszt eredménye nem megbízható. A meghatározást ismételje meg egy másik reagenssel.

2. A konglutációs reakció zselatin alkalmazásával. Monoklonális reagensek és szokásos hiányos antitestekkel rendelkező izoimmun anti-rezus szérum alkalmazhatók erre a tesztre. Ellenőrzést kell végezni zselatin oldattal, anélkül, hogy Rhesus anti-reagenst tartalmazna.

a) Pipettázzunk 1 csepp (kb. 0,05 ml) vizsgálati vért vagy vörösvértestek szuszpenzióját (kb. 50%).
b) Adjunk hozzá 2 csepp (0,1 ml) 10% -os zselatin oldatot, előmelegítve 46-48 ° C-on, hogy cseppfolyósítsuk..
c) Adjunk hozzá 2 csepp (0,1 ml) anti-D reagenst és keverjük össze.
d) Helyezze a csövet vízfürdőbe 46-48 ° C hőmérsékleten 5-10 percre, vagy száraz levegő termosztátba ugyanazon a hőmérsékleten 30 percre..
e) Öntsen 5-8 ml fiziológiás sóoldatot a kémcsőbe, és óvatosan fordítsa meg az dugóval lezárt csövet 1-2 alkalommal a keveréshez.
f) Határozzuk meg az agglutinátumok jelenlétét szabad szemmel vagy a nagyítón keresztül.
g) Az eredményeket azonnal rögzítse..

Pozitív eredménnyel az agglutinátumok megkülönböztethetők különböző méretű aggregátumok formájában átlátszó háttérrel - a vér Rh-pozitív. Negatív eredmény esetén a kémcsőben nincs aggregátum, és látható a vörösvértestek egyenletes színű, átlátszatlan szuszpenziója - a vér Rh-negatív. Ha finomszemcsés kétes agglutinációt észlelnek, akkor a vért indirekt antiglobulin-teszttel kell megvizsgálni (lásd a III. Bekezdést). A zselatin teszt eredményei csak akkor megbízhatók, ha maga a zselatin nem okoz a vizsgált vörösvértestek agglutinációját, és a standard vörösvértestekkel végzett kontroll eredményei a vártnak felelnek meg. Nem megfelelő eredmények esetén a Rhesus-kapcsolat meghatározását meg kell ismételni egy másik reagenssel vagy egy másik zselatin mintával. Ha a zselatin önmagában okozza a vizsgált vörösvértestek agglutinációját, akkor feltételezhetjük, hogy anti-Rhesus antitestek vagy más fajlagosságuk van-e rajtuk (ez megfigyelhető újszülött hemolitikus betegsége, autoimmun hemolitikus anémia és néhány fertőző betegség esetén). Ebben az esetben a vért vizsgálatra kell küldeni egy speciális szerológiai laboratóriumba.

III. Indirekt antiglobulin-teszt (közvetett Coombs-teszt) nem teljes anti-D ellenanyagok felhasználásával.

a) Készítsen 2-5% -os vörösvértestek szuszpenzióját, háromszor mossuk fiziológiás sóoldatban. Ehhez tegyen 5 csepp (körülbelül 0,25 ml) tesztvért egy kémcsőbe, mosson háromszor 5-10 ml fiziológiás sóoldatban; szuszpendáljuk az eritrociták üledékét 2-3 ml fiziológiás sóoldatban, vagy lehetőleg 2-3 ml alacsony ionerősségű oldatban - LISS, amelyben a vörösvértestek elleni antitestek kötődése erősebb és gyorsabb, mint a fiziológiás sóoldatban.
b) Pipettázzunk 1 csepp anti-D reagenst egy tiszta, címkézett csőbe.
c) Adjon hozzá 1 csepp 2-5% -os vörösvértestek szuszpenzióját ("a" bekezdés).
d) Inkubálja a keveréket 37 ° C-on 30-45 percig (ha a vörösvértestek sóoldatban vannak) vagy 10-15 percig (ha a vörösvértestek LISS-ben vannak).
e) Mossuk le a vörösvérsejteket egyszer (monoklonális reagens használata esetén) vagy 3-szor (immun-anti-D szérum alkalmazása esetén) nagy mennyiségű (5-10 ml) fiziológiás sóoldattal. Az egyszeri mosás csak monoklonális reagensek használata esetén megengedett. Távolítsa el a sóoldatot teljesen.
f) Adjunk hozzá 1 csepp antiglobulin reagenst a csapadékhoz és alaposan keverjük össze.
g) Centrifugáljuk 15-20 másodpercig 900-1000 g sebességgel (körülbelül 2000-3000 ford / perc).
h) Finoman szuszpendáljuk újra a pellettet, és szemrevételezéssel ellenőrizzük az agglutináció jelenlétét.
i) Azonnal rögzítse a meghatározás eredményeit.

Agglutináció hiányában a vért Rh-negatívnak, pozitív reakcióval - Rh-pozitívnak kell tekinteni; a D u alcsoportjai gyenge agglutinációt okozhatnak még ebben a nagyon érzékeny vizsgálatban. Mielőtt a donor D u-t Rh-pozitívnak rendeli, ellenőrizze a következtetést az antiglobulin szérum kontroll Rh-negatív vörösvértestekkel végzett kontroll vizsgálatával. Ha a kontrollteszt pozitív, az értelmezés nem megbízható, és egy ilyen donor vérét nem szabad a transzfúzióhoz felhasználni, amíg a rézis-kapcsolatának végső meghatározása megtörténik..

IV. Proteolitikus enzimekkel kezelt vörösvérsejtek agglutinációja hiányos anti-D ellenanyagok felhasználásával.

A hiányos antitestek közvetlen agglutinációt okozhatnak a bromelinnel, papainnal, tripszinnel és más proteázokkal kezelt eritrociták sóközegében. Ez a módszer nagyon érzékeny és megbízható a D antigén gyenge formáinak kimutatására. Elsősorban a vércsoportok automatikus meghatározására használják a Gruppomatik típusú rendszerekben, amelyekben a vörösvértestek szokásos enzimekkel történő feldolgozása biztosított, és a szükséges reagenshígítást külön választják meg, mivel a próba jelenség (a túlzott antitestek általi agglutináció gátlása) jellemzi ezt a tesztet. A vércsoportok kézi meghatározásával a módszer speciális szerológiai laboratóriumokban alkalmazható különféle módosításokkal, ami nem teszi lehetővé annak teljes leírását ezen iránymutatásokban.

MÓDSZERI AJÁNLÁSOK A VÉRDONOR ÉS A VEGYESÍTŐ SZERETÉNEK INDIVIDÁLIS KOMPATATIVITÁSÁNAK VÁSÁRLÁSA

Az egyéni kompatibilitási teszt célja a vörösvérsejtek transzfúziójának megakadályozása, amelyek összeegyeztethetetlenek a beteg szérumával. A recipiens szérumnak a tervezett donor vörösvértesteivel történő tesztelése a legmegbízhatóbb módszer az ellenanyagok azonosítására, amelyek károsíthatják a transzfundált vörösvértesteket, az átültetés utáni reakciókat, beleértve a hemolitikusokat. Az ilyen teszt elvégzése lehetővé teszi: 1) megerősíteni az adományozó és a recipiens ABO-kompatibilitását; 2) a donor eritrocita antigének elleni antitest jelenlétének azonosítása a recipiens szérumában.

Egyéni kompatibilitási tesztelési technika.

Minden esetben, kivéve a sürgõs transzfúziókat, a tesztet két szakaszban kell elvégezni: az elsõ - antiglobulin-reagens használata nélkül, a második - antiglobulin-reagenssel vagy zselatin felhasználásával. Zselatin használata esetén a módszer kevésbé érzékeny. Sürgõ transzfúziók esetén kétlépéses meghatározást javasolunk alacsony ionerõsségû (LISS) oldattal..

1. Helyezzen 2 csepp recipiens szérumot egy jelölt csőbe.
2. Adjon hozzá 1 csepp 5% -os szuszpenziót háromszor mosott donor eritrocitákból sóoldatban vagy alacsony ionerősségű LISS oldatban (az ellenanyag rögzítése jobb az alacsony ionerősségű közegben, ezért célszerű a vörösvértesteket LISS oldatban mérni, amelyet általában a gyártó szállít az antiglobulin reagenssel)..
3. Azonnal centrifugálja 2000 fordulat / perc sebességgel 15-20 másodpercig.
4. Vizsgálja meg a felülúszót hemolízis szempontjából. Finoman rázva a csövet, válassza le a sejtpelletet a cső aljától és ellenőrizze, hogy vannak-e agglutinátumok. A hemolízis és / vagy agglutinációk jelenléte ebben a szakaszban a következőket jelentheti: a) összeférhetetlenség az ABO rendszerben; b) nem ABO-specifitású, szobahőmérsékleten aktív antitestek jelenléte a szérumban a szérumban (anti-S, anti-P1, anti-M stb.).

A második szakasz antiglobulin reagenssel

5. Ha nincs hemolízis, és a csövek rázása után a vörösvértestek homogén szuszpenziót képeznek, inkubáljuk a csövet 30-45 percig (LISS használatával, az inkubációs idő 10-15 perc) 37 ° C-on..
6. Centrifugáljuk a csövet a 3. lépésben leírtak szerint, és vizsgáljuk meg a felülúszót hemolízis és agglutináció szempontjából. A hemolízis és / vagy agglutinációk jelenléte (a csövek rázása után) azt jelzi, hogy a recipiensben teljes donorvörösvérsejtek elleni termikus antitestek vannak jelen a befogadóban..
7. Ha nincs hemolízis és agglutináció, mossa le a vörösvértesteket 3-4-szer nagy mennyiségű (legalább 5 ml) sóoldattal (a nem megfelelő mosás az antiglobulin reagens szérummaradékkal történő inaktiválódásához vezethet, és téves negatív eredményt eredményezhet); az utolsó mosás után teljesen távolítsa el a sóoldatot.
8. Adjunk hozzá 1-2 csepp antiglobulin szérumot és alaposan keverjük össze.
9. Centrifugáljuk a csövet a 3. lépés szerint, óvatosan szakítsuk meg a pellettet és nézzük meg a csövet az agglutinációk szempontjából.
Az antiglobulin reagens minőségét a gyártó garantálja. Ne használjon lejárt reagenst vagy ismételt fagyasztás-olvasztás után. Kontrollként (ha kétségei vannak a reagens minőségével kapcsolatban) hasznos antiglobulin-teszt elvégzése a standard Rh-pozitív és Rh-negatív vörösvértestekkel (lásd: Útmutató a vér rézusos rokonságának meghatározásához)..

A második lépés zselatin használatakor

5. Ha nincs hemolízis, és a csövek rázása után a vörösvértestek homogén szuszpenziót képeznek, adjunk hozzá 2 csepp 10% -os zselatin oldatot, felmelegítjük, hogy cseppfolyósuljon, és alaposan keverjük össze..
6. Inkubálja a csövet 46-48 ° C-on 10 percig vízfürdőben vagy 30 percig száraz levegő termosztátban.
7. Adjon hozzá 5-8 ml sóoldatot, és óvatosan csukja le a zárt csövet, hogy 1-2-szer keverje.
8. Az agglutinációt szabad szemmel vagy a nagyítón keresztül a csőre nézzen..

Ne használjon zselatint, ha az nem fagy le a hűtőszekrényben, zavaros vagy pehelyeket képez. Nem fagyasztható a zselatin. A zselatin oldat nem okozhat nem specifikus agglutinációt, ezért minden zselatin sorozatot ellenőrizni kell nem szenzibilizált vörösvértestekkel.

Ha sürgõs transzfúzióra van szükség, akkor csak a kompatibilitási teszt 1-4. Szakaszára lehet korlátozódni. Ebben az esetben is lehetséges egy egyéni kompatibilitási vizsgálat elvégzése síkon úgy, hogy 1 csepp recipiens szérumot és egy csepp donor eritrocitát összekeverünk (a szérum és a vér arányának kb. 5: 1-nek kell lennie). Ebben az állításban az egyéni kompatibilitási teszt valójában csak az ABO rendszerben található kompatibilitás azonosítására korlátozódik.

A donor akkor tekinthető kompatibilisnek, ha sem az egyedi kompatibilitási teszt egyik szakaszában sem hemolízist, sem agglutinációt nem figyelnek meg. Jelenlétük jelzi az állítólagos donor vörösvérsejtjeivel szembeni ellenanyagok jelenlétét a szérumban. Az ilyen betegeknek át kell adniuk a vörösvérsejteket, amelyek nem tartalmazzák azokat az antigéneket, amelyek ellen az ellenanyagok irányulnak. Emlékeztetni kell arra, hogy az egyedi kompatibilitási teszt nem ad információt az ellenanyagok specifitásáról a recipiens szérumában. Sajátosságukat csak tipizált vörösvértestekkel végzett vizsgálatok során lehet megállapítani..

Fontos, Hogy Tisztában Dystonia